荧光分光光度技术张培敏
荧光分光光度技术 张培敏
实验目的一、，1、了解荧光分光光度计的主要结构及工作原理2、掌握荧光光度计的操作技术3、掌握测定维生素片B2中核黄素的实验方法
一、实验目的 • 1、了解荧光分光光度计的主要结构及工作 • 原理 2、掌握荧光光度计的操作技术 3、掌握测定维生素片B2中核黄素的实验方 法
二、基本原理定性分析--根据激发曲线、发射曲线的特性(二)定量分析稀溶液中，荧光强度与浓度成正比·(三)荧光分析法的特点一一灵敏度高，选择性好
二、基本原理 • （一）定性分析——根据激发曲线、发射 曲线的特性 • （二）定量分析——稀溶液中，荧光强度 与浓度成正比 •（三）荧光分析法的特点——灵敏度高， 选择性好
()定性分析VR2S2分子激发态21ic0-0IVR21Si2分子激发态1T1TVRisc=01V=0F--A2Aiclisc小小32分子基态SoU=0A1A12图分子内的光物理过程A,A2吸收F一荧光P一磷光ic一内转化isc-体系间审联VR一振动弛豫
（一）定性分析
荧光（磷光）：光致发光照射光波长如何选择？1.荧光(磷光)的激发光谱曲线--入ex固定测量波长（选最大发射波长），化合物发射的（图中曲荧光（磷光）强度与照射光波长的关系曲线线1）激发光谱曲线的最高处，处于激发态的分子最多，荧光强度最大；通过激发光谱，选择最佳激发波长一一发射荧光（磷光)强度最大的激发光波长，常用 入ex表示
荧光(磷光)：光致发光 照射光波长如何选择？ 1.荧光(磷光)的激发光谱曲线-λex 固定测量波长(选最大发射波长),化合物发射的 荧光(磷光)强度与照射光波长的关系曲线 （图中曲 线I ） 。 激发光谱曲线的最高处，处于激发态的分子最多 ，荧光强度最大；通过激发光谱，选择最佳激发波 长——发射荧光(磷光)强度最大的激发光波长，常 用λex表示