贵州师范大学蛋白质分离纯化与检测实验技术课程大纲（2013级使用）院（部）：生命科学学院编制人：万晴姣审核人：适用专业：生物技术2013年7月2日
贵州师范大学蛋白质分离纯化与检测实验 技术课程大纲 （2013 级使用） 院（部）： 生命科学学院 编制人： 万 晴 姣 审核人： 适用专业： 生物技术 2013 年 7 月 2 日
《蛋白质分离纯化与检测实验技术》实验大纲课程名称：蛋白质分离纯化与检测实验技术课程代码：2410900011学分：2学时：32适用专业（专业类）：生物技术一、课程的目的与任务：蛋白质分离纯化与检测实验技术是生物技术专业发展方向必修课。它的目的和任务是：（1）学习设计实验的基本思路，学会严密的组织自己的实验，合理地安排实验步骤和时间：（2）学会熟练使用蛋白质分离检测实验仪器、准确翔实记录实验现象和数据的技能，提高实验报告的写作能力，培养严谨细致的科学作风：（3）掌握蛋白质研究的实验技术，尤其是电泳技术、层析技术和免疫检测技术，为今后参加科研工作打下坚实基础。实验项目与学时分配：二、实验性质备注序学实验项目号时验设选综必证合计做做蛋白质层析分离和蛋白质分子V/112量测定技术28VJIEF电泳法蛋白质的免疫检测技术之312Vwestern-blot4V12V胰蛋白酶的结晶和活力测定58VV脲酶的制备和动力学研究VV612酵母蔗糖酶的提取及性质研究三、课程的基本内容：实验一：蛋白质层析分离和蛋白质分子量测定技术1.实验目的：了解凝胶过滤法的分离原理：通过测定蛋白质分子量，掌握凝胶过滤层析的分离方法应用，并了解层析操作过程中的注意事项。2.实验内容：凝胶的溶胀，试剂的配制，凝胶层析装置的组装和平衡、测定Vo和Vt，分离蛋白质混合物，测定蛋白的分子量、凝胶的回收与保存
《蛋白质分离纯化与检测实验技术》实验大纲 课程名称：蛋白质分离纯化与检测实验技术 课程代码：2410900011 学 分：2 学 时：32 适用专业（专业类）：生物技术 一、课程的目的与任务： 蛋白质分离纯化与检测实验技术是生物技术专业发展方向必修课。它的目的和任务是：（1） 学习设计实验的基本思路，学会严密的组织自己的实验，合理地安排实验步骤和时间；（2）学会 熟练使用蛋白质分离检测实验仪器、准确翔实记录实验现象和数据的技能，提高实验报告的写作 能力，培养严谨细致的科学作风；（3）掌握蛋白质研究的实验技术，尤其是电泳技术、层析技术 和免疫检测技术，为今后参加科研工作打下坚实基础。 二、实验项目与学时分配： 序 号 实验项目 学 时 实验性质 备注 验 证 综 合 设 计 必 做 选 做 1 蛋白质层析分离和蛋白质分子 量测定技术 12 √ √ 2 IEF 电泳法 8 √ √ 3 蛋白质的免疫检测技术之 western-blot 12 √ √ 4 胰蛋白酶的结晶和活力测定 12 √ √ 5 脲酶的制备和动力学研究 8 √ √ 6 酵母蔗糖酶的提取及性质研究 12 √ √ 三、课程的基本内容： 实验一：蛋白质层析分离和蛋白质分子量测定技术 1．实验目的：了解凝胶过滤法的分离原理；通过测定蛋白质分子量，掌握凝胶过滤层析的分 离方法应用，并了解层析操作过程中的注意事项。 2．实验内容：凝胶的溶胀，试剂的配制，凝胶层析装置的组装和平衡、测定 Vo 和 Vt，分离蛋 白质混合物，测定蛋白的分子量、凝胶的回收与保存
实验二：IEF电泳法1.实验目的：了解等电聚焦的原理，通过蛋白质等电点的测定，掌握聚丙烯酰胺凝胶垂直管式等电聚焦电泳技术和应用。2.实验内容：凝胶的配制，圆盘电泳仪的组装，电泳聚焦，剥胶，固定，测定PH梯度。实验三：蛋白质的免疫检测技术之western-blot1.实验目的：学习western-blot的检测原理，通过对原核表达的重组蛋白的检测，掌握Western-blot的操作和应用。2.实验内容：SDS-聚丙烯酰胺凝胶的配制，相关试剂的配制，灌胶，电泳槽的组装，电泳，转模装置的组装，电印迹，酶联免疫检测。实验四：胰蛋白酶的结晶和活力测定1．实验目的：学习如何用盐析法提取分离酶，制备酶结晶，并进行分析鉴定。2.实验内容：胰蛋白酶的提取，盐析和激活，制备粗品，结晶和重结晶，测定蛋白质含量，测定酶活力。实验五：脲酶的制备和动力学研究1.实验目的：学习如何制备和分析鉴定一种酶，并对这种酶的动力学性质作初步的研究。2.实验内容：脉酶的制备，酶活力的测定，制作标准曲线，测定不同[S对应的V，双倒数作图法得Km和Vmax。实验六：酵母蔗糖酶的提取及性质研究1.实验目的：学习如何提取纯化、分析鉴定一种酶，并对这种酶的性质，尤其是动力学性质作初步的研究。2.实验内容：试剂的配制，蔗糖酶的提取和纯化，各级分活性测定及蛋白质含量测定，酶促反应动力学因素研究。四、课程的考核：本课程属于考查科目。学期成绩评定以期末笔试成绩（30%）和实验报告成绩（70%）综合形成。实验报告成绩包含预习报告、实验记录、结果分析、思考题的完成等平时学习表现。学期结束的笔试重点了解学生对实验技能的掌握，运用所学知识设计实验和分析解决实际问题的能力。五、课程参考书、指导书1.万晴姣，蛋白质分离纯化与检测技术实验指导，自编教材，20132，梁宋平主编，生物化学与分子生物学实验教程，高等教育出版社，20033.余冰宾主编，生物化学实验指导，清华大学出版社，20044.李巧枝等编，生物化学实验技术，中国轻工业出版社，20105.（美)JE.科林根等著，李慎涛等译，精编蛋白质科学实验指南，2007
实验二：IEF 电泳法 1．实验目的：了解等电聚焦的原理，通过蛋白质等电点的测定，掌握聚丙烯酰胺凝胶垂直管 式等电聚焦电泳技术和应用。 2．实验内容：凝胶的配制，圆盘电泳仪的组装，电泳聚焦，剥胶，固定，测定 PH 梯度。 实验三：蛋白质的免疫检测技术之 western-blot 1．实验目的：学习 western-blot 的检测原理，通过对原核表达的重组蛋白的检测，掌握 Western-blot 的操作和应用。 2．实验内容： SDS-聚丙烯酰胺凝胶的配制，相关试剂的配制，灌胶，电泳槽的组装，电泳， 转模装置的组装，电印迹，酶联免疫检测。 实验四：胰蛋白酶的结晶和活力测定 1．实验目的：学习如何用盐析法提取分离酶，制备酶结晶，并进行分析鉴定。 2．实验内容：胰蛋白酶的提取，盐析和激活，制备粗品，结晶和重结晶，测定蛋白质含量，测 定酶活力。 实验五：脲酶的制备和动力学研究 1．实验目的：学习如何制备和分析鉴定一种酶,并对这种酶的动力学性质作初步的研究。 2．实验内容：脲酶的制备，酶活力的测定，制作标准曲线，测定不同[S]对应的 v，双倒数作 图法得 Km 和 Vmax。 实验六：酵母蔗糖酶的提取及性质研究 1．实验目的：学习如何提取纯化、分析鉴定一种酶,并对这种酶的性质，尤其是动力学性质作 初步的研究。 2．实验内容：试剂的配制，蔗糖酶的提取和纯化，各级分活性测定及蛋白质含量测定，酶促 反应动力学因素研究。 四、课程的考核： 本课程属于考查科目。学期成绩评定以期末笔试成绩（30%）和实验报告成绩（70%）综合形成。 实验报告成绩包含预习报告、实验记录、结果分析、思考题的完成等平时学习表现。学期结束的笔 试重点了解学生对实验技能的掌握，运用所学知识设计实验和分析解决实际问题的能力。 五、课程参考书、指导书 1．万晴姣，蛋白质分离纯化与检测技术实验指导，自编教材，2013 2．梁宋平主编，生物化学与分子生物学实验教程，高等教育出版社，2003 3. 余冰宾主编，生物化学实验指导，清华大学出版社，2004 4. 李巧枝等编，生物化学实验技术，中国轻工业出版社，2010 5. (美)J E.科林根等著，李慎涛等译，精编蛋白质科学实验指南，2007