b：为吸收层厚度K：比例常数3.物理意义当一束平行单色光垂直通过某一均匀非散射的吸光物质时，起其吸光度A与吸光物质的浓度c及吸收层厚度b成正比。4.葱酮比色法葱酮比色法是一个快速而简便的定糖方法。糖类在较高温度下可被浓硫酸作用而脱水生成糠醛或羟甲基糖醛后，与葱酮脱水缩合，形成糠醛的衍生物呈蓝绿色，在620nm处有最大吸收。葱酮可与其他一些糖类发生反应，但显现的颜色不同。当样品中存有含较多色氨酸的蛋白质时，反应不稳定，呈现红色。对于特定的糖类，反应较稳定。本法多用于测定糖原含量，亦可用于测定葡萄糖含量。三．实验试剂（1）葱酮试剂：取0.2g葱酮溶于100mL80%（V/V)硫酸中，当日配制使用；（2）标准葡萄糖溶液（0.1mg/mL)：（可滴加几滴甲苯作防腐剂)：（3）糖样品溶液。四。实验步骤1.制作标准曲线：取干试管6支，依次加入标准糖溶液0，0.2，0.4，0.6,0.8，1.0ml，并依次用蒸馏水补足体积到1mL，各管均加入葱酮试剂4mL，沸水浴准确煮沸10min，室温放置10min，用1号试管溶液调零，比色测定A620。用标准糖溶液浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，制作标准曲线，管号1#7#2#3#4#5#6#6
6 b：为吸收层厚度 K：比例常数 3.物理意义 当一束平行单色光垂直通过某一均匀非散射的吸光物质时,起其吸光度 A 与吸光物质的浓度 c 及吸收层厚度 b 成正比。 4.蒽酮比色法 蒽酮比色法是一个快速而简便的定糖方法。糖类在较高温度下可被浓硫酸作用而脱水生成糠醛 或羟甲基糖醛后，与蒽酮脱水缩合，形成糠醛的衍生物呈蓝绿色，在 620nm 处有最大吸收。 蒽酮 可与其他一些糖类发生反应，但显现的颜色不同。当样品中存有含较多色氨酸的蛋白质时，反应不 稳定，呈现红色。对于特定的糖类，反应较稳定。 本法多用于测定糖原含量，亦可用于测定葡萄 糖含量。 三．实验试剂 （1）蒽酮试剂：取 0.2g 蒽酮溶于 100mL 80%(V/V)硫酸中，当日配制使用； （2）标准葡萄糖 溶液(0.1mg/mL)：(可滴加几滴甲苯作防腐剂)； （3）糖样品溶液。 四．实验步骤 1.制作标准曲线： 取干试管 6 支，依次加入标准糖溶液 0，0.2，0.4，0.6,0.8，1.0 ml,并依次用蒸馏水补足体 积到 1mL，各管均加入蒽酮试剂 4mL，沸水浴准确煮沸 10min，室温放置 10min，用 1 号试管溶液调 零，比色测定 A620。用标准糖溶液浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，制作标准曲线。 管号 1# 2# 3# 4# 5# 6# 7#
标准葡00.20.60.8萄糖溶0. 41.0液(ml)0蒸馏水1.00.80.60. 40. 20(ml)样品液////1. 0/(ml)置冰水浴中冷却5min葱酮试4. 04.04. 04. 04. 04. 04. 0剂(ml)沸水浴中准确加热10min，取出，用自来水冷却，室温放置10minA620nm2.样糖溶液待测浓度00. 020.040.060.080.10品含(mg/ml)糖量测定：无蛋白糖溶液样品溶液稀释100倍，吸取1mL置试管中，再加入4mL葱酮试剂，沸水浴中煮沸10分钟，取出后自来水冷却后比色，其他条件与做标准曲线相同，测得的吸光度值由标准曲线查算出样品液的糖含量（mg/ml）。五、实验结果
7 2. 样 品 含 糖 量 测定：无蛋白糖溶液样品溶液稀释 100 倍，吸取 1mL 置试管中，再加入 4mL 蒽酮试剂，沸水浴中煮 沸 10 分钟，取出后自来水冷却后比色，其他条件与做标准曲线相同，测得的吸光度值由标准曲线 查算出样品液的糖含量（mg/ml）。 五、实验结果 标准葡 萄糖溶 液(ml) 0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 0 蒸馏水 (ml) 1.0 0.8 0.6 0.4 0.2 0 样品液 (ml) ／ ／ ／ ／ ／ ／ 1.0 置冰水浴中冷却 5min 蒽酮试 剂(ml) 4.0 4.0 4.0 4.0 4.0 4.0 4.0 沸水浴中准确加热 10min，取出，用自来水冷却，室温放置 10min A620nm 糖溶液 浓度 (mg/ml) 0 0.02 0.04 0.06 0.08 0.10 待测
1.制作标准曲线2.计算样品中糖浓度六、思考题H2SO在实验中起什么作用？酪蛋白的制备一、实验目的1、学习从牛奶中制备酪蛋白的原理和方法。2、掌握等电点沉淀法提取蛋白质的方法。二、实验原理牛乳中的主要的蛋白质是酪蛋白，含量约为35g/L。酪蛋白是一些含磷蛋白质的混合物，等电点为4.7。利用等电点时溶解度最低的原理，将牛乳的pH调至4.7时，酪蛋白就沉淀出来。用乙醇洗涤沉淀物，除去脂类杂质后便可得到纯酪蛋白。离心机的使用说明：1.要离心的离心管和管套要称重，重量不等时将水加在管套里。2.离心管的放置是对角线放置，要求必须对称。3.先将离心机转速旋钮恢复到零刻度后，再定时间，定好时间后缓慢旋转转速旋钮，使离心机均匀的提速到预定转速。0
8 1.制作标准曲线 2.计算样品中糖浓度 六、思考题 H2SO4 在实验中起什么作用？ 酪蛋白的制备 一、实验目的 1、学习从牛奶中制备酪蛋白的原理和方法。 2、掌握等电点沉淀法提取蛋白质的方法。 二、实验原理 牛乳中的主要的蛋白质是酪蛋白，含量约为 35g/L。酪蛋白是一些含磷蛋白质的混合物，等电 点为 4.7。利用等电点时溶解度最低的原理，将牛乳的 pH 调至 4.7 时，酪蛋白就沉淀出来。用乙 醇洗涤沉淀物，除去脂类杂质后便可得到纯酪蛋白。 离心机的使用说明： 1.要离心的离心管和管套要称重，重量不等时将水加在管套里。 2．离 心管的放置是对角线放置，要求必须对称。 3. 先将离心机转速旋钮恢复到零刻度后，再定时 间，定好时间后缓慢旋转转速旋钮，使离心机均匀的提速到预定转速