实验九质粒DNA的提取与检测
实验九 质粒DNA的提取与检测
实验目的.....................实验原理试剂器材实验步骤思考题5
1 实验目的 2 实验原理 3 试剂器材 4 实验步骤 5 思考题
实验日的1、学习质粒DNA的提取原理与琼脂糖凝胶电泳原理；2、掌握质粒DNA的提取方法3、掌握电泳检测DNA的方法
实验目的 1、学习质粒 DNA 的提取原理与琼脂糖凝胶电 泳原理； 2、掌握质粒 DNA 的提取方法； 3、掌握电泳检测DNA的方法
实验原理质粒（Plasmid）是一种染色体外的稳定遗传因子，大小从1-200kb不等，为双链、闭环的DNA分子，以超螺旋状态存在于宿主细胞中。质粒主要发现于细菌、放线菌和真菌细胞中，它具有自主复制和转录能力能在子代细胞中保持恒定的拷贝数，并表达所携带的遗传信息。在细菌细胞内，共价闭环质粒以超螺旋形式存在。在提取质粒过程中，除了超螺旋DNA外，还会产生其它形式的质粒DNA。如果质粒DNA两条链中有一条链发生一处或多处断裂，分子就能旋转而消除链的张力，形成松驰型的环状分子，称开环DNA(OpencircularDNA，简称ocDNA)：如果质粒DNA的两条链在同一处断裂，则形成线状DNA(LinearDNA)。当提取的质粒DNA电泳时，同一质粒DNA其超螺旋形式的泳动速度要比开环和线状分子的泳动速度快
实验原理 质粒(Plasmid)是一种染色体外的稳定遗传因子,大小从1- 200kb 不等,为双链、闭环的DNA 分子,以超螺旋状态存在于宿 主细胞中。质粒主要发现于细菌、放线菌和真菌细胞中，它具 有自主复制和转录能力,能在子代细胞中保持恒定的拷贝数,并 表达所携带的遗传信息。在细菌细胞内,共价闭环质粒以超螺 旋形式存在。在提取质粒过程中，除了超螺旋DNA 外，还会 产生其它形式的质粒DNA。如果质粒DNA 两条链中有一条链 发生一处或多处断裂,分子就能旋转而消除链的张力,形成松驰 型的环状分子,称开环DNA(Open circular DNA, 简称ocDNA)； 如果质粒DNA 的两条链在同一处断裂,则形成线状DNA(Linear DNA)。当提取的质粒DNA 电泳时,同一质粒DNA 其超螺旋形 式的泳动速度要比开环和线状分子的泳动速度快
实验原理琼脂糖凝胶电泳是分离鉴定和纯化DNA片段的标准方法琼脂糖主要在DNA制备电泳中作为一种固体支持基质，其密度取决于琼脂糖的浓度。在电场中在中性pH值下带负电荷的DNA向阳极迁移，其迁移速率由下列多种因素决定：DNA的分子大小，琼脂糖浓度，DNA分子的构象，电源电压，嵌入染料的存在及离子强度等。该技术操作简便快速，可以分辨用其它方法（如密度梯度离心法）所无法分离的DNA片段。当用低浓度的荧光嵌入染料漠化乙啶（Ethidiumbromide，EB）染色，在紫外光下至少可以检出1-10ng的DNA条带，从而可以确定DNA片段在凝胶中的位置
实验原理 琼脂糖凝胶电泳是分离鉴定和纯化DNA 片段的标准方法。 琼脂糖主要在DNA 制备电泳中作为一种固体支持基质,其密度 取决于琼脂糖的浓度。在电场中,在中性pH 值下带负电荷的 DNA 向阳极迁移,其迁移速率由下列多种因素决定: DNA 的分 子大小，琼脂糖浓度，DNA 分子的构象，电源电压，嵌入染 料的存在及离子强度等。 该技术操作简便快速，可以分辨用其它方法（如密度梯度离心 法）所无法分离的DNA 片段。当用低浓度的荧光嵌入染料溴 化乙啶(Ethidium bromide, EB） 染色,在紫外光下至少可以检 出1-10ng 的DNA条带，从而可以确定DNA片段在凝胶中的位 置