生物化学实验吴意珣王远鹏王世珍王海涛邵文尧编厦门大学化学工程与生物工程系2014-2-20
生物化学实验 吴意珣 王远鹏 王世珍 王海涛 邵文尧 编 厦门大学化学工程与生物工程系 2014-2-20
目录实验室守则实验记录及实验报告实验一淀粉的提取和水解实验二总糖与还原糖的测定..实验三蛋白质等电点测定，实验四 酪蛋白的制备.11实验五氨基酸的分离鉴定一纸层析法13P实验六蛋白质含量的测定..16实验七血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳...29实验八SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳测定蛋白质亚基分子量36实验九底物浓度对酶活力的影响（米氏常数的测定）41实验十影响酶活性的因素..45实验十一猪脾DNA的制备...49实验十二DNA的定量测定..52实验十三维生素C的定量测定.54仪器的使用..60附录..62
i 目 录 实 验 室 守 则. 1 实验记录及实验报告. 2 实验一 淀粉的提取和水解. 4 实验二 总糖与还原糖的测定. 6 实验三 蛋白质等电点测定. 9 实验四 酪蛋白的制备. 11 实验五 氨基酸的分离鉴定－纸层析法. 13 实验六 蛋白质含量的测定. 16 实验七 血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳. 29 实验八 SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳测定蛋白质亚基分子量. 36 实验九 底物浓度对酶活力的影响（米氏常数的测定） . 41 实验十 影响酶活性的因素. 45 实验十一 猪脾 DNA 的制备. 49 实验十二 DNA 的定量测定. 52 实验十三 维生素 C 的定量测定. 54 仪器的使用. 60 附 录. 62
实验室守则1、遵守课堂纪律，认真进行实验每个学员应该自觉地遵守课堂纪律，维护课堂秩序，保持室内安静，不大声谈笑。实验过程中要听从教师指导，严格认真地按操作规程进行实验。并简要、准确地将实验结果和数据记录在实验记录本上，完成实验后经教师检查同意，方可离开实验室、实验后要认真写好实验报告，由课代表按期收交给教师，不无故拖延。2、保持整洁保持环境和仪器的整齐清洁是做好实验的重要条件，也是每个实验者必须养成的良好的工作习惯。实验台面和试剂药品架上都必须保持整洁，仪器药品放置要有次序，不要把试剂、药品酒在实验台面和地上，废液应倒进水槽内（强酸强碱必须都应倒入废品缸内，不可倒入水槽或随地乱扔实验完毕需将仪器洗净收好，药品试排列整齐。把实验台面抹擦干净，保持实验室整齐清洁。3、药品使用使用药品试剂必须注意节约杜绝浪费，要特别注意保持药品和试剂的纯净，药品用后须立即将瓶盖塞紧放回原处，从瓶中取出的试剂，标准溶液等，如未用尽切勿倒回瓶内，避免混杂。4、仪器使用各种仪器用具均应注意爱护，细心使用，防止损坏，使用分析天平，分光光度计和电动离心机等贵重精密仪器，要严格遵守操作规程，发现故障立即报告教师，不要自己动手检修，要爱护国家财产，厉行节约。5、注意安全为了有效地维护实验室安全，保证实验正常进行，要求：1）要严格做到：火看人在，人走火灭：2）勿使乙醚、丙酮、醇类等易燃液体接近火焰，蒸发或加热此类液体时，必须在水浴上进行，切勿用直火加热；3）凡比水轻且不与水相混溶之物（如醚、苯、汽油等）着火时，应迅速用湿毛巾覆盖火焰，以隔绝空气使其熄灭，绝不能倒水于其上，以免火焰蔓延，对于易与水混溶之物（如乙醇、丙酮等）着火时，可用火扑灭之；4）有不少药品是有毒或有腐蚀性的不可用手直接拿药品，不可将试剂瓶直接对准鼻子闻，更不可尝药品味道。吸取有毒试剂，强酸和强碱时，均应用洗耳球，严禁用口吸取；5）离开实验室时，要关好水龙头，拉下电闸，认真负责地进行检查，严防不安全事故：6）每次实验课由班长安排同学轮流值日，值日生要负责当天实验室的卫生、安全和一切服务性工作。1
1 实 验 室 守 则 1、遵守课堂纪律，认真进行实验 每个学员应该自觉地遵守课堂纪律，维护课堂秩序，保持室内安静，不大声谈笑。实验过程中 要听从教师指导，严格认真地按操作规程进行实验。并简要、准确地将实验结果和数据记录在实验 记录本上，完成实验后经教师检查同意，方可离开实验室、实验后要认真写好实验报告，由课代表 按期收交给教师，不无故拖延。 2、保持整洁 保持环境和仪器的整齐清洁是做好实验的重要条件，也是每个实验者必须养成的良好的工作习 惯。实验台面和试剂药品架上都必须保持整洁，仪器药品放置要有次序，不要把试剂、药品洒在实 验台面和地上，废液应倒进水槽内（强酸强碱必须都应倒入废品缸内，不可倒入水槽或随地乱扔。 实验完毕需将仪器洗净收好，药品试排列整齐。把实验台面抹擦干净，保持实验室整齐清洁。 3、药品使用 使用药品试剂必须注意节约杜绝浪费，耍特别注意保持药品和试剂的纯净，药品用后须立即将 瓶盖塞紧放回原处，从瓶中取出的试剂，标准溶液等，如未用尽切勿倒回瓶内，避免混杂。 4、仪器使用 各种仪器用具均应注意爱护，细心使用，防止损坏，使用分析天平，分光光度计和电动离心机 等贵重精密仪器，要严格遵守操作规程，发现故障立即报告教师，不要自己动手检修，要爱护国家 财产，厉行节约。 5、注意安全 为了有效地维护实验室安全，保证实验正常进行，要求： 1）要严格做到：火着人在，人走火灭； 2）勿使乙醚、丙酮、醇类等易燃液体接近火焰，蒸发或加热此类液体时，必须在水浴上进行， 切勿用直火加热； 3）凡比水轻且不与水相混溶之物（如醚、苯、汽油等）着火时，应迅速用湿毛巾覆盖火焰，以 隔绝空气使其熄灭，绝不能倒水于其上，以免火焰蔓延，对于易与水混溶之物（如乙醇、丙酮等） 着火时，可用火扑灭之； 4）有不少药品是有毒或有腐蚀性的不可用手直接拿药品，不可将试剂瓶直接对准鼻子 闻， 更不可尝药品味道。吸取有毒试剂，强酸和强碱时，均应用洗耳球，严禁用口吸取； 5）离开实验室时，要关好水龙头，拉下电闸，认真负责地进行检查，严防不安全事故； 6）每次实验课由班长安排同学轮流值日，值日生要负责当天实验室的卫生、安全和一切服务性 工作
实验记录及实验报告一、实验记录实验课前应认真预习，将实验名称、目的和要求、原理、实验内容、操作方法和步骤等简单扼要地写在记录本中。实验记录本应标上页数，不要撕去任何一页，事不要抹擦及涂改，写错时可以准确地划去重写，记录时必须使用钢笔或圆珠笔。实验中观察到的现象、结果和数据，应该及时地直接记在记录本上，绝对不可以用单片纸做记录或草稿。原始记录必须准确、简炼、详尽、清楚，从实验课开始就应养成这种良好的习惯。记录时，应做到正确记录实验结果，切忌夹杂主观因素，这是十分重要的。在实验条件下观察到的现象，应如实仔细地记录下来；在定量实验中观测的数据，如称量物的重量，滴定管的读数。光电比色计或分光光度计的读数等，都应设计一定的表格准确记下正确的读数，并根据仪器的精确度准确记录有效数字。例如，光密度值为0.050，不应写成0.05。实验记录上的每一个数字，都是反映每一次的测量结果，所以，重复观测时即使数据完全相同也应如实记录下来。数据的计算也应该写在记录本的另一页上，一般写在正式记录左边的一页。总之，实验的每个结果都应正确无遗漏地做好记录。实验中使用仪器的类型、编号以及试剂的规格、化学式、分子量准确的浓度等，都应记录清楚以便总结实验进行校对和作为查找成败原因的参考依据。如果发现记录的结果有怀疑、遗漏、丢失等，都必须重做实验。因为，将不可靠的结果当做正确的记录，在实际工作中可能造成难以估计的损失，所以，在学习期间就应一丝不苟，努力培养严谨的科学作风。二、实验报告实验结束后，应及时整理和总结实验结果，写出实验报告按照实验内容可分为定性和定量实验两大类，下面分别列举这两类实验报告的格式，仅供参考。1、关于定性实验报告实验（编号）（实验名称）（一）目的和要求（二）原理（三）试剂和仪器（四）操作方法（五）结果与讨论一般每次实验课做数个定性实验，实验报告中的实验名称和目的要求应该是针对这次实验课的全部内容而必须达到的自的和要求。在写实验报告时，可以按照实验内容分别写原理、操作方法2
2 实验记录及实验报告 一、实验记录 实验课前应认真预习，将实验名称、目的和要求、原理、实验内容、操作方法和步骤等简单扼 要地写在记录本中。 实验记录本应标上页数，不要撕去任何一页，事不要抹擦及涂改，写错时可以准确地划去重写， 记录时必须使用钢笔或圆珠笔。 实验中观察到的现象、结果和数据，应该及时地直接记在记录本上，绝对不可以用单片纸做记 录或草稿。原始记录必须准确、简炼、详尽、清楚，从实验课开始就应养成这种良好的习惯。 记录时，应做到正确记录实验结果，切忌夹杂主观因素，这是十分重要的。在实验条件下观察 到的现象，应如实仔细地记录下来；在定量实验中观测的数据，如称量物的重量，滴定管的读数。 光电比色计或分光光度计的读数等，都应设计一定的表格准确记下正确的读数，并根据仪器的精确 度准确记录有效数字。例如，光密度值为 0.050，不应写成 0.05。实验记录上的每一个数字，都是反 映每一次的测量结果，所以，重复观测时即使数据完全相同也应如实记录下来。数据的计算也应该 写在记录本的另一页上，一般写在正式记录左边的一页。总之，实验的每个结果都应正确无遗漏地 做好记录。 实验中使用仪器的类型、编号以及试剂的规格、化学式、分子量准确的浓度等，都应记录清楚， 以便总结实验进行校对和作为查找成败原因的参考依据。 如果发现记录的结果有怀疑、遗漏、丢失等，都必须重做实验。因为，将不可靠的结果当做正 确的记录，在实际工作中可能造成难以估计的损失，所以，在学习期间就应一丝不苟，努力培养严 谨的科学作风。 二、实验报告 实验结束后，应及时整理和总结实验结果，写出实验报告．按照实验内容可分为定性和定量实 验两大类，下面分别列举这两类实验报告的格式，仅供参考。 l、关于定性实验报告 实验（编号）（实验名称） （一）目的和要求 （二）原理 （三）试剂和仪器 （四）操作方法 （五）结果与讨论 一般每次实验课做数个定性实验，实验报告中的实验名称和目的要求应该是针对这次实验课 的全部内容而必须达到的目的和要求。在写实验报告时，可以按照实验内容分别写原理、操作方法
结果与讨论等。原理部分应简述基本原理。操作方法（或步骤）可以采用工艺流程图的方式或自行设计的表格来表示（某些实验的操作方法可以和结果与讨论部分合并，自行设计各种表格综合书写）。结果与讨论包括实验结果及观察现象的小结、对实验课遇到的问题（和思考题）进行探讨以及对实验的改进意见等。2、关于定量实验报告实验（编号）（实验名称）（一）目的和要求（二）原理（三）试剂和仪器（四）操作方法（五）结果处理（六）讨论通常每次实验课只做一个定量实验，在实验报告中，目的和要求、原理以及操作方法部分应简单扼要的叙述，但是对于实验条件（试剂及仪器）和操作的关键环节必须写清楚，对于实验结果部分，应根据实验课的要求将一定实验条件下获得的实验结果和数据进行整理、归纳、分析和对比并尽量总结成各种图表，如原始数据及其处理的表格、标准曲线图（以及比较实验组与对照组实验结果的图表）等。（另外，还应针对实验结果进行必要的说明和分析）。讨论部分可以包括：关于实验方法（或操作技术）和有关实验的一些问题，如实验的正常结果和异常现象（以及思考题）进行探讨，于实验设计的认识、体会和建议，对实验课的改进意见等。3
3 结果与讨论等。原理部分应简述基本原理。操作方法（或步骤）可以采用工艺流程图的方式或自行 设计的表格来表示（某些实验的操作方法可以和结果与讨论部分合并，自行设计各种表格综合书写）。 结果与讨论包括实验结果及观察现象的小结、对实验课遇到的问题（和思考题）进行探讨以及对实 验的改进意见等。 2、关于定量实验报告 实验（编号）（实验名称） （一）目的和要求 （二）原理 （三）试剂和仪器 （四）操作方法 （五）结果处理 （六）讨论 通常每次实验课只做一个定量实验，在实验报告中，目的和要求、原理以及操作方法部分应简 单扼要的叙述，但是对于实验条件（试剂及仪器）和操作的关键环节必须写清楚，对于实验结果部 分，应根据实验课的要求将一定实验条件下获得的实验结果和数据进行整理、归纳、分析和对比， 并尽量总结成各种图表，如原始数据及其处理的表格、标准曲线图（以及比较实验组与对照组实验 结果的图表）等。（另外，还应针对实验结果进行必要的说明和分析）。讨论部分可以包括：关于实 验方法（或操作技术）和有关实验的一些问题，如实验的正常结果和异常现象（以及思考题）进行 探讨，于实验设计的认识、体会和建议，对实验课的改进意见等