碱性磷酸酶Km值的测定王世珍
碱性磷酸酶Km值的 测定 王世珍
【实验目的】1.了解酶的Km值测定原理和方法（AKP）活性测2．掌握碱性磷酸酶定的原理和方法
【实验目的】 1.了解酶的Km值测定原理和方法 2．掌握碱性磷酸酶（AKP）活性测 定的原理和方法
【实验原理）·在温度，pH及酶浓度恒定的条件下，酶促反应的初速度随底物浓度（S）增大而增加但当底物浓度增大到一定极限时，则反应速度趋于恒定，此最大反应速度Vmax，反应速度与底物浓度之间的关系可用米氏方程来表示，即：
【实验原理】 • 在温度，pH及酶浓度恒定的条件下，酶促 反应的初速度随底物浓度（S）增大而增加， 但当底物浓度增大到一定极限时，则反应 速度趋于恒定，此最大反应速度Vmax，反 应速度与底物浓度之间的关系可用米氏方 程来表示，即：
酶的底物浓度与酶促反应速度的关系一般情况下符合米氏（Michaelis-Menten）理论根据中间产物学说，酶促反应的动力学模型可以表示为：k1k2E + SESE+Pk-1oVo时间（分）图酶反应进程曲钱+
酶的底物浓度与酶促反应速度的关系一般 情况下符合米氏（Michaelis-Menten）理论。 根据中间产物学说，酶促反应的动力学模 型可以表示为： E + S ES E + P k1 k-1 k2
·E、S、ES和P分别表示酶、底物、酶底物中间物和产物；k1、k.1、k是各步反应的速度常数。按照中间产物学说，可以推导出米氏方程为：max零级反应混合级反应Vm [S]-Vmax1Km +[S]一级反应[S]底物浓度对反应初速度的影响式中：[S]为底物浓度：v为初速度：Vm为最大反应速度）；Km为米氏常数
• E、S、ES和P分别表示酶、底物、酶底物 中间物和产物；k1、k-1、k2是各步反应的速 度常数。按照中间产物学说，可以推导出 米氏方程为： v V S K S m m [ ] [ ] 式中：[S]为底物浓度；v为初速度；Vm为最大反应速度）；Km 为米氏常数 底物浓度对反应初速度的影 响