实验十一检测碱性磷酸酶SDS-PAGE
实 验 十 一 SDS-PAGE 检测碱性磷酸酶
实验目的1.掌握电泳技术的基本原理2.掌握SDS-PAGE检测蛋白质分子的原理和技术
1.掌握电泳技术的基本原理。 2.掌握SDS-PAGE检测蛋白质分子的原理和技术。 实验目的
1.电泳技术的基本原理电泳：#带电粒子在电场中的定向移动。影响泳动率u的因素SampleSamplewellsCathode内因：1.净电荷Buffer2.质点大小Plasticframe3.质点形状GelAnodeBuffer外因：1.V(U/L)（pH恒定）2.缓冲液的pH3.离子强度门最适：0.02-0.24.电渗：液体对固体支持物的相对移动
1. 电泳技术的基本原理 电泳：带电粒子在电场中的定向移动。 影响泳动率u的因素 内因：1.净电荷 2.质点大小 3.质点形状 外因：1.V ( U/L) 2.缓冲液的pH (pH恒定) 3.离子强度[I] 最适:0.02-0.2 4.电渗：液体对固体支持物的相对移动
2.SDS-PAGE电泳原理B样品胶浓缩胶分离胶AY国快离子蛋白质慢离子电泳过程示意图A为电泳前3层凝胶排列顺序，3层胶中均有快离子，慢离子B显示电泳开始后，蛋白质样品夹在快、慢离子之间被浓缩成极窄的区带。C显示蛋白质样品分离成数个区带
电泳过程示意图 A为电泳前3层凝胶排列顺序，3层胶中均有快离子，慢离子 B显示电泳开始后，蛋白质样品夹在快、慢离子之间被浓缩成极窄的区带。 C显示蛋白质样品分离成数个区带。 2. SDS-PAGE电泳原理
2.SDS-PAGE电泳原理聚丙烯酰胺凝胶是由丙烯酰胺（Acr)和交联剂N，N'一亚甲基双丙烯酰胺（Bis）在催化剂作用下，聚合交联而成的具有网状立体结构的凝胶，并以此为支持物进行电泳。聚丙烯酰胺凝胶电泳可根据不同蛋白质分子所带电荷的差异及分子大小的不同将蛋白质分离成若于条区带。SDS与蛋白质结合，掩盖各种蛋白分子间天然的电荷差异。因此，各种蛋白质-SDS复合物在电泳时的迁移率，不再受原有电荷和分子形状的影响，而只与分子大小相关
2. SDS-PAGE电泳原理 聚丙烯酰胺凝胶是由丙烯酰胺 (Acr) 和交联剂N，N’—亚甲 基双丙烯酰胺（Bis）在催化剂作用下，聚合交联而成的具有网 状立体结构的凝胶，并以此为支持物进行电泳。 聚丙烯酰胺凝胶电泳可根据不同蛋白质分子所带电荷的差异 及分子大小的不同将蛋白质分离成若干条区带。 SDS与蛋白质结合, 掩盖各种蛋白分子间天然的电荷差异。 因此，各种蛋白质-SDS 复合物在电泳时的迁移率，不再受原 有电荷和分子形状的影响，而只与分子大小相关