值为其特征常数。现将影响R，值的因素概括如下：1、物质结构的影响：极性物质易溶于极性溶剂（水）中，非极性物质易溶于非极性溶剂（有机溶剂）中，所以物质的极性大小决定了物质在水和有机溶剂之间的分配情况。例如酸性和碱性氨基酸极性大于中性氨基酸，所以前者在水（固定相）中分配较多，因此R，低于后者。一CH一基是疏水性基团，如果分子中极性基数目不变，则一CHz一基增加，整个分子的极性就降低，因此易溶于有机溶剂（流动相）中，R值亦随之增加，例如氨基酸的R，值：甘氨酸<丙氨酸<亮氨酸，二羧基氨基酸中，天冬氨基酸<谷氨酸。极性基团的位置不同也会引起R,变化，例如在正丁醇-甲酸-水系统中层析时，α-丙氨酸的R,值大于β-丙氨酸。2、溶剂的影响：同一物质在不同溶剂中R值不同，选择溶剂系统时应使被分离物质在适当R值范围内（0.005到0.85之间），并且不同物质的R，至少差别为0.05才能彼此分开。溶剂的极性大小也影响物质的R,值。在用与水互溶的脂肪醇作为溶剂时，氨基酸的R,值随着溶剂碳原子数目增加而降低。3、pH的影响：溶剂系统的pH会影响物质极性基团的解离形式，如对于酸性氨基酸，在酸性时所带净电荷比碱性时少，带电荷越少亲水性越小，因此在酸性溶剂中R值较碱大。而碱性氨基酸则与此相反。借此性质用酸相和碱相溶剂进行双向层析，可使酸碱性不同的氨基酸达到分离的目的。溶剂的pH还可影响有机溶剂（流动相）含水量，溶剂酸碱度大，则含水量多。对于极性物质如氨基酸来说R值增加，非极性物质则减少。若pH不适合，使同种物质有不同解离形式，其R也略有不同，则此物质层析呈带状图谱。因此溶剂中的酸或碱的含量必须足够，并且层析缸（或箱）中用酸或碱的气体饱和才可以防止上述现象，使物质得到圆点状图谱。4、滤纸的影响：层析滤纸必须质地均匀、紧密，有一定机械强度，并且杂质较少，如纸中含有Ca2+、Mg2+、Cu2+等金属离子杂质，可与氨基酸形成络合物使层析图谱出现阴影，可用稀酸（0.01mol/L或0.4mol/L-HCI）洗涤滤纸将之除去。5、温度的影响：温度不仅影响物质在溶剂中的分配系数，而且影响溶剂相的组成及纤维素的水合作用。温度变化对R值影响很大，所以层析最好在恒温室中进行，控制温度相差不超过0.5℃。除上述因素影响R值外，样品中含有盐份和其他杂质以及点样过多均会影响样品的有效分离。无色物质的层析图谱可用光谱法（紫外光照射）或显色法鉴定，氨基酸层析图谱常用三酮或吲哚醒作显色剂。三酮显色反应受温度、pH、时间影响较大，如果要使实验结果能很好重复，必须严格控制上述条件。样品中如含有大量盐酸会使氨基酸不易显色，如含有大量盐时显色点上会出现白斑，此外空气中的杂质如氨、硫化氢或酚等都会影响显色结果。铜离子可以与氨基酸-三酮显色物形成络合物，颜色较稳定。用硫酸酮乙醇溶液洗脱层析后的14
14 值为其特征常数。 现将影响 R f 值的因素概括如下： 1、物质结构的影响：极性物质易溶于极性溶剂（水）中，非极性物质易溶于非极性溶剂（有机 溶剂）中，所以物质的极性大小决定了物质在水和有机溶剂之间的分配情况。例如酸性和碱性氨基 酸极性大于中性氨基酸，所以前者在水（固定相）中分配较多，因此 R f 低于后者。 —CH2—基是疏水性基团，如果分子中极性基数目不变，则—CH2—基增加，整个分子的极性就 降低，因此易溶于有机溶剂（流动相）中，Rf 值亦随之增加，例如氨基酸的 R f 值：甘氨酸＜丙氨酸 ＜亮氨酸，二羧基氨基酸中，天冬氨基酸＜谷氨酸。 极性基团的位置不同也会引起 Rf 变化，例如在正丁醇-甲酸-水系统中层析时，α-丙氨酸的 R f 值 大于 β-丙氨酸。 2、溶剂的影响：同一物质在不同溶剂中 R f值不同，选择溶剂系统时应使被分离物质在适当 Rf 值范围内（0.005 到 0.85 之间），并且不同物质的 R f 至少差别为 0.05 才能彼此分开。 溶剂的极性大小也影响物质的 Rf 值。在用与水互溶的脂肪醇作为溶剂时，氨基酸的 Rf值随着溶 剂碳原子数目增加而降低。 3、pH 的影响：溶剂系统的 pH 会影响物质极性基团的解离形式，如对于酸性氨基酸，在酸性 时所带净电荷比碱性时少，带电荷越少亲水性越小，因此在酸性溶剂中 Rf 值较碱大。而碱性氨基酸 则与此相反。借此性质用酸相和碱相溶剂进行双向层析，可使酸碱性不同的氨基酸达到分离的目的。 溶剂的 pH 还可影响有机溶剂（流动相）含水量，溶剂酸碱度大，则含水量多。对于极性物质 如氨基酸来说 Rf 值增加，非极性物质则减少。若 pH 不适合，使同种物质有不同解离形式，其 Rf也 略有不同，则此物质层析呈带状图谱。因此溶剂中的酸或碱的含量必须足够，并且层析缸（或箱） 中用酸或碱的气体饱和才可以防止上述现象，使物质得到圆点状图谱。 4、滤纸的影响：层析滤纸必须质地均匀、紧密，有一定机械强度，并且杂质较少，如纸中含有 Ca2+、Mg2+、Cu2+等金属离子杂质，可与氨基酸形成络合物使层析图谱出现阴影，可用稀酸（0.01 mol/L -1 或 0.4 mol/L -1HCl）洗涤滤纸将之除去。 5、温度的影响：温度不仅影响物质在溶剂中的分配系数，而且影响溶剂相的组成及纤维素的水 合作用。温度变化对 Rf值影响很大，所以层析最好在恒温室中进行，控制温度相差不超过±0.5℃。 除上述因素影响 Rf 值外，样品中含有盐份和其他杂质以及点样过多均会影响样品的有效分离。 无色物质的层析图谱可用光谱法（紫外光照射）或显色法鉴定，氨基酸层析图谱常用茚三酮或 吲哚醌作显色剂。 茚三酮显色反应受温度、pH、时间影响较大，如果要使实验结果能很好重复，必须严格控制上 述条件。样品中如含有大量盐酸会使氨基酸不易显色，如含有大量盐时显色点上会出现白斑，此外 空气中的杂质如氨、硫化氢或酚等都会影响显色结果。 铜离子可以与氨基酸-茚三酮显色物形成络合物，颜色较稳定。用硫酸酮乙醇溶液洗脱层析后的
显色斑点，借比色法可定量测定氨基酸含量。三、器材及试剂1.器材层析缸、毛细管、喷雾器、培养血、电吹风、层析滤纸（新华一号）2.试剂(1）展开剂：溶剂系统（24mL)：正丁醇一乙酸一水（4：1：3，V/V）(2）氨基酸溶液：0.5%的脯氨酸、缬氨酸、丝氨酸、酪氨酸、精氨酸溶液及它们的混合液（各组份浓度均为0.5%）。(3）显色剂：0.1%水合三酮乙醇溶液。四、操作步骤1.将配好的层析液倒入培养血中，把培养血放入层析缸中，盖紧缸盖，放置30分钟。2.取层析滤纸（长18一20厘米，宽14厘米）一张。在垂直于纸的纹路一端距边缘1.5厘米处用铅笔划一条直线，在此直线上每间隔2厘米作一记号，作为点样位置（共6点），并用铅笔在点样点下端写出所点氨基酸的名称。3.点样：用毛细管吸取样品约2cm高，将各氨基酸样品分别点在这六个位置上，用电吹风吹干后再点一次，共点三次。每点在纸上扩散的直径最大不超过5毫米。4．扩展：用线将滤纸缝成筒状，纸的两边不能接触。将滤纸直立于培养血中，点样的一端在下，扩展剂的液面需低于点样线1厘米。当前沿线到达层析纸1/2处时即取出滤纸，用铅笔描出溶剂前沿界线，用电吹风热风吹干。5.显色：用喷雾器均匀喷上0.1%三酮溶液，然后用热风吹干即可显出各层析斑点。6.用铅笔画出层析斑点并算出Rr值。五、注意事项1.为了防止滤纸被手上的汗液污染，在操作时带手套。2.重复点样时可用吹风机的冷风吹干样品，喷了三酮后的显色则要用热风吹干滤纸。六、思考题（1）如何用纸层析法对氨基酸进行定性和定量的测定？（2）纸层析和柱层析、薄层层析、高效液相层析各有什么特点？（3）请对试验中所用的几种氨基酸移动快慢的原因给予简要分析。15
15 显色斑点，借比色法可定量测定氨基酸含量。 三、器材及试剂 1．器材 层析缸、毛细管、喷雾器、培养皿、电吹风、层析滤纸（新华一号） 2．试剂 (1) 展开剂：溶剂系统（24 mL）： 正丁醇－乙酸－水（4：1：3，V/V) (2) 氨基酸溶液：0.5%的脯氨酸、缬氨酸、丝氨酸、酪氨酸、精氨酸溶液及它们的混合液（各组份 浓度均为 0.5%）。 (3) 显色剂：0.1%水合茚三酮乙醇溶液。 四、操作步骤 1．将配好的层析液倒入培养皿中，把培养皿放入层析缸中，盖紧缸盖，放置 30 分钟。 2．取层析滤纸（长 18－20 厘米，宽 14 厘米）一张。在垂直于纸的纹路一端距边缘 1.5 厘米处用铅 笔划一条直线，在此直线上每间隔 2 厘米作一记号，作为点样位置（共 6 点），并用铅笔在点样点下 端写出所点氨基酸的名称。 3．点样：用毛细管吸取样品约 2cm 高，将各氨基酸样品分别点在这六个位置上，用电吹风吹干后 再点一次，共点三次。每点在纸上扩散的直径最大不超过 5 毫米。 4．扩展：用线将滤纸缝成筒状，纸的两边不能接触。将滤纸直立于培养皿中，点样的一端在下，扩 展剂的液面需低于点样线 1 厘米。当前沿线到达层析纸 1/2 处时即取出滤纸，用铅笔描出溶剂前沿 界线，用电吹风热风吹干。 5．显色：用喷雾器均匀喷上 0. 1%茚三酮溶液，然后用热风吹干即可显出各层析斑点。 6．用铅笔画出层析斑点并算出 Rf值。 五、注意事项 1. 为了防止滤纸被手上的汗液污染，在操作时带手套。 2. 重复点样时可用吹风机的冷风吹干样品，喷了茚三酮后的显色则要用热风吹干滤纸。 六、思考题 （1）如何用纸层析法对氨基酸进行定性和定量的测定？ （2）纸层析和柱层析、薄层层析、高效液相层析各有什么特点？ （3）请对试验中所用的几种氨基酸移动快慢的原因给予简要分析
实验六蛋白质含量的测定目的要求1.学习和掌握蛋白质含量测定的原理2.掌握测定蛋白质浓度的操作技术（采用双缩脲法测定蛋白质浓度）（一）微量凯氏定氮法测定蛋白质总含量一、原理天然有机物(如蛋白质和氨基酸等化合物)的总氮量通常用微量凯氏定氮法（Micro-KjeldahlMethod)来测定。当被测的天然含氮化合物与浓硫酸共热时分解出氨，氨与硫酸反应生成硫酸铵，此过程称为消化。由于消化过程进行缓慢，实验中常添加硫酸钾和硫酸铜的混合物来促进，硫酸铜是催化剂，硫酸钾可提高消化液的沸点。氧化剂过氧化氢也能加速反应。消化完成后，在凯氏定氮仪中加入强碱消化液，使硫酸铵分解出氨。用水蒸汽蒸馏法将氨蒸入无机酸溶液中，然后再用标准酸溶液进行滴定，滴定所用无机酸的量(mol)相当于被测样品中氨的量(mol)，根据所测得的氨量即可计算样品的含氮量。上述过程的化学反应如下：(1)消化有机氮化物(C、H、O、N、P、S)+浓H2SO4-CO2+H,O+NHs1+SO,+H,PO4NH,+H,SO4→(NH4)2SO4(2）蒸馏(NH4)2SO4+NaOH-Na2SO4+H2O+NH31(3）吸收NH3+H,BO3→NHHB,O+H20(4）滴定NH,HB,O,+HCI→NH,CI+H,BO,在微量凯氏定氮法中，常用硼酸-指示剂混合液收集氨，氨与溶液中氢离子结合生成铵离子，使溶液中氢离子浓度降低，指示剂颜色发生改变，然后用标准无机酸滴定，直至恢复溶液中原来氢离子浓度，即指示剂变回原来颜色为止。所用无机酸的摩尔数即相当于样品中氨的摩尔数。本法适用范围约为0.2-1mg氨。因为蛋白质含氮量通常在16%左右，所以将凯氏定氮法测得的含氮量乘上系数6.25，便得到该样品的蛋白质含量。16
16 实验六 蛋白质含量的测定 目的要求 1. 学习和掌握蛋白质含量测定的原理 2. 掌握测定蛋白质浓度的操作技术（采用双缩脲法测定蛋白质浓度） （一）微量凯氏定氮法测定蛋白质总含量 一、原理 天然有机物(如蛋白质和氨基酸等化合物)的总氮量通常用微量凯氏定氮法( Micro - Kjeldahl Method )来测定。 当被测的天然含氮化合物与浓硫酸共热时分解出氨，氨与硫酸反应生成硫酸铵，此过程称为消 化。由于消化过程进行缓慢，实验中常添加硫酸钾和硫酸铜的混合物来促进，硫酸铜是催化剂，硫 酸钾可提高消化液的沸点。氧化剂过氧化氢也能加速反应。消化完成后，在凯氏定氮仪中加入强碱 消化液，使硫酸铵分解出氨。用水蒸汽蒸馏法将氨蒸入无机酸溶液中，然后再用标准酸溶液进行滴 定，滴定所用无机酸的量(mol)相当于被测样品中氨的量(mol)，根据所测得的氨量即可计算样品的含 氮量。 上述过程的化学反应如下： (1) 消化 有机氮化物(C、H、O、N、P、S)+浓 H2SO4→CO2+H2O+NH3↑+SO2+H3PO4 NH3+H2SO4→(NH4)2SO4 (2) 蒸馏 (NH4)2SO4+NaOH→Na2SO4+H2O+NH3↑ (3) 吸收 NH3+H3BO3→NH4HB4O7+H2O (4) 滴定 NH4HB4O7+HCl→NH4Cl+H3BO3 在微量凯氏定氮法中，常用硼酸-指示剂混合液收集氨，氨与溶液中氢离子结合生成铵离子，使 溶液中氢离子浓度降低，指示剂颜色发生改变，然后用标准无机酸滴定，直至恢复溶液中原来氢离 子浓度，即指示剂变回原来颜色为止。所用无机酸的摩尔数即相当于样品中氨的摩尔数。本法适用 范围约为 0.2-1 mg 氨。 因为蛋白质含氮量通常在 16 %左右，所以将凯氏定氮法测得的含氮量乘上系数 6.25，便得到该 样品的蛋白质含量
二、试剂和器材1.试剂(1）浓硫酸（AR），(2）粉末硫酸钾-硫酸铜混合物：K2SO4:CuSO4-5H20=3：1、6:1或10：1,(3）40%（W/V)氢氧化钠溶液，4）4%（W/V）硼酸溶液，(5)0.01mol/L标准盐酸（用硼砂标定)：吸取分析纯盐酸（比重1.19，约12mol/L)8.5mL，用蒸馏水稀释至1L，贮于试剂瓶中待标定。准确称取3份干燥的硼砂，每份0.381-0.383g分别放在150mL三角瓶中，加入20mL蒸馏水使其溶解，加入三滴甲基红指示剂（0.1g甲基红溶于250mL水中），用待测的盐酸滴定至橙红色为止，记下盐酸的滴定体积，通过计算即可知道盐酸的准确浓度：W×1000CHCIF-M,xV式中，W为硼砂称量（g)：V为HCI的滴定体积（mL）：M,为硼砂分子量。（6）混合指示剂贮备液：取50mL0.1%甲烯蓝乙醇溶液与200mL0.1%甲基红乙醇溶液混合而成，贮于棕色瓶中备用。此指示剂在pH5.2为紫红色；pH5.4为暗蓝色（或灰色）：pH5.6为绿色。变色范围很窄，变色点pH为5.4，故混合指示剂很灵敏。(7）标准硫酸铵溶液（0.3mg氮/mL)）：取141.6mg分析纯硫酸铵，加水溶解，定容至100mL。2.待测样品：豆浆（市售）3.器材（1）微量凯氏定氮仪，(2）50mL凯氏烧瓶，100mL锥型瓶，50mL酸式滴定管，100mL量筒，100mL容量瓶，100mL烧杯，酒精灯三、操作方法3.1样品的消化在凯氏烧瓶中加入催化剂约50mg，用移液管依次加入3mL均一的豆浆和3mL浓硫酸（移液管要接近凯氏烧瓶底部，不使样品粘附在瓶口或瓶颈）。另取一支凯氏烧瓶加入3mL水代替豆浆，其余试剂同上，此为空白。将凯氏烧瓶放在通风柜内的电炉上加热，火力不要太猛，应以使液体保持微沸状态为宜。瓶内液体遂渐由黄色变为黑色，继而转为淡黄色，最后成清澈淡蓝色溶液，消化即告完全，取出烧瓶冷却，将瓶内液体转移至50mL容量瓶中，加蒸馏水定容至刻度。3.2仪器的装置和蒸洗按图1装好凯氏定氮仪，再用蒸气进行蒸洗，以除去NH和其它干扰物质。蒸洗方法如下：接通冷凝水，打开夹子（J），往蒸馏瓶（B）内加入占球部1/3体积的清水，而后取5mL蒸馏17
17 二、试剂和器材 1. 试剂 (1) 浓硫酸（AR）， (2) 粉末硫酸钾-硫酸铜混合物：K2SO4∶CuSO4·5H2O=3∶1、6∶1 或 10∶1， (3) 40%（W/V)氢氧化钠溶液， (4) 4%（W/V)硼酸溶液， (5) 0.01 mol/L 标准盐酸（用硼砂标定)： 吸取分析纯盐酸（比重 1.19，约 12 mol/L)8.5 mL，用蒸馏 水稀释至 1 L，贮于试剂瓶中待标定。准确称取 3 份干燥的硼砂，每份 0.381-0.383 g 分别放在 150 mL 三角瓶中，加入 20 mL 蒸馏水使其溶解，加入三滴甲基红指示剂（0.1 g 甲基红溶于 250 mL 水中）， 用待测的盐酸滴定至橙红色为止，记下盐酸的滴定体积，通过计算即可知道盐酸的准确浓度： CHCl= M V W r 1000 式中，W 为硼砂称量（g)；V 为 HCl 的滴定体积（mL)；Mr 为硼砂分子量。 (6) 混合指示剂贮备液：取 50 mL 0.1%甲烯蓝乙醇溶液与 200 mL 0.1%甲基红乙醇溶液混合而成， 贮于棕色瓶中备用。此指示剂在 pH 5.2 为紫红色；pH 5.4 为暗蓝色（或灰色）；pH 5.6 为绿色。变色 范围很窄，变色点 pH 为 5.4，故混合指示剂很灵敏。 (7) 标准硫酸铵溶液（0.3 mg 氮/ mL)：取 141.6 mg 分析纯硫酸铵，加水溶解，定容至 100 mL。 2. 待测样品：豆浆(市售) 3. 器材 (1) 微量凯氏定氮仪， (2) 50 mL 凯氏烧瓶，100 mL 锥型瓶，50 mL 酸式滴定管，100 mL 量筒，100 mL 容量瓶，100 mL 烧杯，酒精灯 三、操作方法 3.1 样品的消化 在凯氏烧瓶中加入催化剂约 50 mg，用移液管依次加入 3 mL 均一的豆浆和 3 mL 浓硫酸（移液 管要接近凯氏烧瓶底部，不使样品粘附在瓶口或瓶颈）。另取一支凯氏烧瓶加入 3 mL 水代替豆浆， 其余试剂同上，此为空白。 将凯氏烧瓶放在通风柜内的电炉上加热，火力不要太猛，应以使液体保持微沸状态为宜。瓶内 液体逐渐由黄色变为黑色，继而转为淡黄色，最后成清澈淡蓝色溶液，消化即告完全，取出烧瓶， 冷却，将瓶内液体转移至 50 mL 容量瓶中，加蒸馏水定容至刻度。 3.2 仪器的装置和蒸洗 按图 1 装好凯氏定氮仪，再用蒸气进行蒸洗，以除去 NH3和其它干扰物质。蒸洗方法如下： 接通冷凝水，打开夹子（J），往蒸馏瓶（B）内加入占球部 1/3 体积的清水，而后取 5 mL 蒸馏
水从小漏斗（A）缓慢地注入反应瓶（F），关上夹子（I)，同时加热蒸馏瓶（B），蒸馏反应瓶内的蒸馏水，使其沸腾产生蒸气。产生的气体沿导管上升到冷凝管（C），气体经过冷却从冷凝管末端（G）流入收集瓶。排出反应瓶（F）中的液体，重复蒸洗2~3次，以便较熟练掌握蒸洗的方法。（反应瓶（F）中的液体排出的方法：样品蒸馏完毕后，继续加热使其沸腾，移开酒精灯，关上夹子（I)，稍等片刻，由于蒸馏瓶（B）中的蒸气较反应瓶（F）中的多，所以冷却后蒸馏瓶（B）中的压力比反应瓶（F）的低，反应瓶（F）内的废液迅速地从出样口（H）抽出到反应瓶外，随即自加样小漏斗（A）往反应瓶（F）中较快地倒入一些冷蒸馏水，关上夹子（I)，稍等片刻，反应瓶（F）内的液体又迅速地从出样口（H）抽出，然后打开夹子（K）排出蒸馏瓶中的热水，关上夹子（K），打开夹子（J)，往蒸馏瓶（B）中加入1/3球部体积的清水，即可进行下一次蒸馏）。仪器的安装和蒸洗过程中，应很好地掌握几个夹子的开关关系，避免漏气是实验成败的关键步骤。图1微量凯氏定氮仪装置图A.小漏斗B.蒸馏瓶C.冷凝管D.入水口E.出水口F反应瓶G.冷凝管末端H.出样口I、J、K夹子3.3标准硫酸铵的测定（1）吸取10mL4%硼酸溶液注入三角烧瓶，加入2滴指示剂，将其倾斜地放在冷凝管末端（G）下，使管末端插入溶液内。(2）用移液管准确吸取5mL标准硫酸铵溶液置于小漏斗（A），小心打开夹子（I)，使其缓慢流入反应瓶（H)，用1~2mL蒸馏水冲洗漏斗后放入反应瓶（H)。(3）量取5mL40%NaOH溶液，置小漏斗（A），小心打开夹子，使其缓慢流入反应瓶（H)，同样用18
18 水从小漏斗（A）缓慢地注入反应瓶（F），关上夹子（I），同时加热蒸馏瓶（B），蒸馏反应瓶内的 蒸馏水，使其沸腾产生蒸气。产生的气体沿导管上升到冷凝管（C），气体经过冷却从冷凝管末端（G） 流入收集瓶。排出反应瓶（F）中的液体，重复蒸洗 23 次，以便较熟练掌握蒸洗的方法。（反应瓶 （F）中的液体排出的方法：样品蒸馏完毕后，继续加热使其沸腾，移开酒精灯，关上夹子（I），稍 等片刻，由于蒸馏瓶（B）中的蒸气较反应瓶（F）中的多，所以冷却后蒸馏瓶（B）中的压力比反 应瓶（F）的低，反应瓶（F）内的废液迅速地从出样口（H）抽出到反应瓶外，随即自加样小漏斗 （A）往反应瓶（F）中较快地倒入一些冷蒸馏水，关上夹子（I），稍等片刻，反应瓶（F）内的液体 又迅速地从出样口（H）抽出，然后打开夹子（K）排出蒸馏瓶中的热水，关上夹子（K），打开夹子 （J），往蒸馏瓶（B）中加入 1/3 球部体积的清水，即可进行下一次蒸馏）。仪器的安装和蒸洗过程 中，应很好地掌握几个夹子的开关关系，避免漏气是实验成败的关键步骤。 3.3 标准硫酸铵的测定 (1) 吸取 10 mL 4%硼酸溶液注入三角烧瓶，加入 2 滴指示剂，将其倾斜地放在冷凝管末端（G）下， 使管末端插入溶液内。 (2) 用移液管准确吸取 5 mL 标准硫酸铵溶液置于小漏斗（A），小心打开夹子（I），使其缓慢流入反 应瓶（H），用 12 mL 蒸馏水冲洗漏斗后放入反应瓶（H）。 (3) 量取 5 mL 40% NaOH 溶液，置小漏斗（A），小心打开夹子，使其缓慢流入反应瓶（H），同样用 图 1 微量凯氏定氮仪装置图 A．小漏斗 B．蒸馏瓶 C．冷凝管 D．入水口 E．出水口 F．反应瓶 G．冷凝管末端 H．出样口 I、J、K. 夹子